筛选杂交鉴定（筛选杂交鉴定报告）

cDNA文库的筛选鉴定

1 核酸杂交

是最常用,最可靠的 *** 之一.可大规模地分析文库的克隆子.

1)同源探针:至少含有所需cDNA克隆的一部分确切序列.常用于以一个部分克隆分离cDNA文库中的全长克隆.

2)部分同源探针:探针的序列与所要筛选的cDNA克隆的序列相关但不相同.常用于克隆家族基因.

3)总cDNA探针:

通过反转录酶均匀掺入放射性核苷酸或通过总的或分级分离得到的poly(A)+mRNA进行末端标记而获得cDNA探针.

cDNA扣除探针:

从之一种mRNA制备cDNA探 针, 连续多次与20倍过量的第二种mRNA杂交;

回收未杂交的cDNA探针, 再与100倍过量的之一种mRNA杂交, 使得原mRNA中的一些特异序列得到高度富集.

* 主要用于探测cDNA文库中与调节水平有所差别的mRNA克隆.

5)合成寡核苷酸探针

2 特异性免疫学检测

在cDNA表达文库中,目的基因的表达产 物能与特异性抗体发生免疫学反应,通过酶学的 *** 加以检测

3 cDNA克隆的同胞检测

将cDNA文库分成若干组含有10-100个克隆子的易于处理的亚cDNA文库,对每组亚cDNA文库进行检测,当鉴定出阳性库后再不断将其分成更细的库进行检测,直到获得阳性单克隆.

4 cDNA克隆的确证

cDNA克隆含有编码某一特定蛋白质的完整氨基酸序列的开放读框.

第四节 目的基因的分离

外源基因:

插入到载体内的那个特定的片段基因.

目的基因:

那些已被或者准备要分离,改造,扩增或表达的特定基因或DNA片段.

重组DNA可以从哪几个方面进行筛选和鉴定

之一：可以在重组的DNA中提前插入一个标记基因，一般是抗·抗生素基因（抗四环素、抗链霉素···），那么如果目的基因的插入点在一个标记基因中的话，观察那个标记基因的表达。

第二：DNA探针

第三：抗原抗体杂交技术

第四：直接检查产物

植物基因工程的内容(基因克隆 *** 、连接、转化、筛选及鉴定)

1）目的基因制备和分离：一般通过文库筛选、同源序列比对等 *** 进行克隆。

2）DNA重组载体的构建：选择植物表达载体，根据载体选择或添加酶切位点，然后进行酶切连接，构建重组载体。

3）转化：转化 *** 有多种：农杆菌法：将重组载体用电击或热激的 *** 将其转入农杆菌中，再用农杆菌侵染植物；基因枪法：将重组载体与金粉混合后用基因枪轰击组织块；此外还有其他一些 *** 。

4）植物阳性植株的筛选和鉴定：一般先用抗性初次筛选后，在基因水平上用PCR扩增目的片段或做Southern杂交；在RNA水平上做半定量或Nouthern杂交.

5）基因表达产物的分离纯化和鉴定：这是蛋白水平上的鉴定，一般是提取纯化蛋白，做蛋白分析。

筛选鉴定基因工程菌的 *** 有哪些

1.功能互补法:使突变株表达，与空白相对比

2.核酸杂交法:使用突变株基因单链与原基因杂交，能完全配就未能成功

3.定位克隆

4.差别杂交分离目地基因